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技術(shù)專題

顯微鏡的基礎(chǔ)知識(shí)(一)

發(fā)布日期:2014-07-08 點(diǎn)擊:2199

    顯微鏡: 用于放大微小物體使其被人的肉眼能清晰看到的儀器。顯微鏡分光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。

    光學(xué)顯微鏡 是在1590年由荷蘭的楊森父子所首創(chuàng)?,F(xiàn)在的光學(xué)顯微鏡可把物體放大1600倍,分辨的最小極限達(dá)0.2微米。

    電子顯微鏡 是在1931年在德國柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長(zhǎng)

    比光波短得多,所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍,分辨的最小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看

到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。

顯微鏡的發(fā)明,使人看到了許多以前從未看到過的生物,如細(xì)菌、病毒等,也使人看到了生物的許多微小結(jié)構(gòu),如線粒體的結(jié)構(gòu),從而對(duì)生物學(xué)的發(fā)展起著重要的推動(dòng)作用。顯微鏡是生物學(xué)研究的重要儀器之一。在醫(yī)學(xué)、工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中顯微鏡也有著重要用途,例如在醫(yī)學(xué)診斷上,可對(duì)人血液中的紅細(xì)胞進(jìn)行病理分析并計(jì)數(shù)等。 顯微鏡的放大原理:

顯微鏡的放大原理:由物鏡將被觀測(cè)物體(標(biāo)本)放大為可以被屏幕接收映射的實(shí)像,通過目鏡的轉(zhuǎn)換,使物鏡成的實(shí)像再次放大并讓其成在人眼正??次矬w的明視距離處。

明視距離:250mm (人眼看物體的正常距離) 放大鏡的原理:人眼觀察到的是放大的虛像

顯微鏡的結(jié)構(gòu):

被觀測(cè)物體(標(biāo)本)-物鏡-光闌-目鏡-人眼 早期顯微鏡-------現(xiàn)代顯微鏡 

普通顯微鏡主要由3部分構(gòu)成:

①光學(xué)放大系統(tǒng):由物鏡和目鏡組成,是顯微鏡的主體。(為了消除球差和色差,目鏡和物鏡都由復(fù)雜的透鏡組構(gòu)成。)

②照明系統(tǒng):包括光源和聚光鏡。

③機(jī)械裝置:用于固定材料和使觀察方便。

放大率和有效放大率(又稱放大倍數(shù)):

物體通過顯微鏡要經(jīng)過物鏡和目鏡兩次放大,所以顯微鏡總的放大率Γ應(yīng)該是物鏡放大率β和目鏡放大率Γ1 的乘積:

即 Γ = β Γ1

顯微鏡可以通過調(diào)換不同放大率的物鏡和目鏡,能夠方便地改變顯微鏡的放大率。放大率是顯微鏡的重要參數(shù),但也不能盲目相信放大率越高越好。顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率,被稱為鏡頭的分辨率。 分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有聯(lián)系的概念。 當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大,即分辨率不夠高時(shí),顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu),此時(shí)即使過度地增大放大倍率,得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像,稱為無效放大倍率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不足,則顯微鏡雖已具備分辨的能力,但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力,應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配。

鏡頭分辨率(有效放大率):

顯微鏡物象是否清楚不僅決定于放大倍數(shù),還與顯微鏡的分辨力(resolution)有關(guān),分辨力是指顯微鏡(或人的眼睛距目標(biāo)

25cm處)能分辨物體最小間隔的能力,分辨力的大小決定于光的波長(zhǎng)和 數(shù)值孔徑(又稱:鏡口率)以及介質(zhì)的折射率,用公式表

示為:

顯微鏡的分辨力: R=0.61λ /NA

NA=nSin α/2 (數(shù)值孔徑)

式中: λ 為成像光線的波長(zhǎng);

n = 標(biāo)本和物鏡之間介質(zhì)折射率;

α = 鏡口角(標(biāo)本對(duì)物鏡鏡口的張角) ;

NA = 數(shù)值孔徑(Numeric Aperture)。

鏡口角總是要小于180˚,所以 Sin α /2 的最大值必然小于 1 。

介質(zhì)的折射率 n:

制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65~1.78,所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。對(duì)于干燥物鏡來說,介質(zhì)為空氣,數(shù)值

孔徑一般為0.05~0.95;油鏡頭用香柏油為介質(zhì),數(shù)值孔徑可接近1.5。

顯微鏡的分辨力與放大率的關(guān)系式: 500NA<Γ<1000NA

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