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技術(shù)專題

顯微鏡的基礎(chǔ)知識(shí)(二)

發(fā)布日期:2014-07-08 點(diǎn)擊:2118

景深:

     景深為聚焦深度的簡(jiǎn)稱,即在使用顯微鏡時(shí),當(dāng)焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)某一物體時(shí),不僅位于該點(diǎn)平面上的各點(diǎn)都可以看清楚,而且在此平面的上下一定深度內(nèi),也能看得清楚,這個(gè)清楚部分的深度就是景深。景深大,可以看到被檢物體的深層;而景深小,則只能看到被檢物體的一薄層。景深與其它技術(shù)參數(shù)有以下關(guān)系:

(1)景深與總放大倍數(shù)及物鏡的數(shù)值孔徑成反比。 (2)景深增大,分辨率降低。

      顯微鏡物鏡的基本類型: a.消色差物鏡(Achromatic objective) 這是應(yīng)用較廣泛的一類顯微物鏡,外殼上常有"Ach"字樣。它校正了軸上點(diǎn)的位置色差(紅,藍(lán)二色)、球差(黃綠光)和正弦差,保持了齊明條件。軸外點(diǎn)的象散不超過允許值(-4屈光度),二級(jí)光譜未校正。

     b.復(fù)消色差物鏡(Apochromatic objective) 這類物鏡的結(jié)構(gòu)復(fù)雜,透鏡采用了特種玻璃或螢石等材料制作而成,物鏡的外殼上標(biāo)有"Apo"字樣。它對(duì)兩個(gè)色光實(shí)現(xiàn)了正弦條件,要求嚴(yán)格地校正軸上點(diǎn)的位置色差(紅,藍(lán)二色)、球差(紅,藍(lán)二色)和正弦差,同時(shí)要求校正二級(jí)光譜(再校正綠光的位置色差)。其倍率色差并不能完全校正,一般須用目鏡補(bǔ)償。

     c.平場(chǎng)物鏡(Plan objective) 平場(chǎng)物鏡是在物鏡的透鏡系統(tǒng)中增加一快半月形的厚透鏡,以達(dá)到校正場(chǎng)曲的缺陷,提高視場(chǎng)邊緣成像質(zhì)量的目的。平場(chǎng)物鏡的視場(chǎng)平坦,更適用于鏡檢和顯微照相。對(duì)于平視場(chǎng)消色差物鏡,其倍率色差不大,不必用特殊目鏡補(bǔ)償。而平視場(chǎng)復(fù)消色差物鏡,則必須用目鏡來補(bǔ)償它的倍率色差。

     d.特種物鏡 所謂"特種物鏡"是在上述物鏡的基礎(chǔ)上,專門為達(dá)到某些特定的觀察效果而設(shè)計(jì)制造的。主要有以下幾種:相襯物鏡(Phase-contrast objective),熒光物鏡(Fluorescence objective),偏光無應(yīng)力物鏡(Polarize objective),帶校正環(huán)物鏡(Correction collar objective)等。

     還有按顯微鏡結(jié)構(gòu)分類的: (1)按顯微鏡鏡筒長(zhǎng):透射光用160mm鏡筒,帶0.17mm厚或更厚的蓋玻片;反射光用190mm鏡筒,不帶蓋玻片;透射光與反射光用鏡筒,筒長(zhǎng)無限大。(2)按浸法特征:非浸式(干式)、浸式(油浸、水浸、甘油浸及其它浸法)。 (3)按光學(xué)裝置:透射式、反射式以及折反射式。

光學(xué)顯微鏡成像光波:

     光學(xué)顯微鏡的成像研究和設(shè)計(jì),是以人眼可見光光線(人們常說的:可見光)的物理現(xiàn)象為基礎(chǔ)進(jìn)行的??梢姽獾牟ㄩL(zhǎng)為400~700nm,因此 光學(xué)顯微鏡分辨力數(shù)值不會(huì)小于0.2μm。人眼的分辨力是0.2mm,所以一般光學(xué)顯微鏡設(shè)計(jì)的最大光學(xué)放大倍數(shù)通常1000X。

電子顯微鏡成像機(jī)理:

     光學(xué)顯微鏡的分辨力受可見光波長(zhǎng)的限制,質(zhì)量較好的光學(xué)顯微鏡的分辨極限約為0.2μm。小于光波波長(zhǎng)的物體因衍射而不能成像。為了觀察到更細(xì)微的物體和結(jié)構(gòu),科學(xué)家采用更短波長(zhǎng)的電子射線來代替光波,設(shè)計(jì)出了電子顯微鏡。電子微粒高速運(yùn)動(dòng)時(shí),其行為類似光波的傳播過程。運(yùn)動(dòng)電子的電子波波長(zhǎng)隨其速度而定,給其增壓達(dá)到50萬伏時(shí),電子波波長(zhǎng)約為0.001nm,即電子射線的波長(zhǎng)約為可見光的十萬分之一。其分辨力的極限約為4Å,其放大倍數(shù)比更高級(jí)的光學(xué)顯微鏡要高很多級(jí)。以電子射線為成像“光源”的顯微鏡稱為電子顯微鏡。

鏡頭像差:

(待續(xù))

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